FORMAT LAPORAN PEMBUATAN MEDIA REAGENSIA MIKROBIOLOGI UJI BIOKIMIA

 FORMAT LAPORAN PEMBUATAN MEDIA REAGENSIA MIKROBIOLOGI UJI BIOKIMIA

MUHAMMAD ARIEF FADILLAH, S.ST, M.KES

LAPORAN PRAKTIKUM MEDIA

JUDUL                    : Pembuatan Media Penunjang Uji Biokimia Bakteriologi

HARI/TANGGAL     : 19 September  2022                                      

TUJUAN                 :- Agar mahasiswa mengetahui macam- macam media penunjang    untuk uji biokimia bakteriologi                                              

-    Agar mahasiswa mengetahui cara pembuatan media  penunjang    untuk uji biokimia bakteriologi                                          

-   Sterilisasi media.                                                

-    Mengetahui kegunaan dari media penunjang    untuk uji biokimia bakteriologi                                               

                  

PENDAHULUAN      :   Media identifikasi adalah perbenihan yang digunakan untuk menentukan jenis bakteri. Biasanya digunakan beberapa media bersama-sama dan mempunyai fungsi masing – masing antara lain ; Media Gula-gula yang berfungsi untuk uji fermentasi, Media MRVP untuk mengetahui adanya fermentasi asam campuran atau fermentasi butanadiol dan digunakan dalam pemeriksaan laboratorium, khususnya tes biokimia. Media TSIA untuk uji hydrogen sulfide dan fermentasi, juga biasa di pakai untuk identifikasi enterobactericeae. Media SIM  tes ini  biasanya digunakan untuk diferensiasi golongan enterobacteriaceae, untuk melihat suatu organisme tersebut apakah  memecah sulfur,memproduksi indol dan untuk melihat  pergerakan (motil). SCA Untuk identifikasi mikroorganisme (terutama entrobacteriaceae dan jenis fungi tertentu) berdasarkan kemampuan nya memetabolisme citrate, sebagai sumber karbohidrat Dnase Agar ;Kegunaan Untuk identifikasi mikroorganisme, khususnya Staphylococcus yang Dnase + (positip),.

 

ALAT DAN BAHAN :    ¤ PERALATAN

         -    Tabung reaksi                         -Erlenmeyer                     

-       Beaker glas                           -Bunsen  

-       Autoklaft                                -Batang pengaduk                 

-       Neraca                                  - Hot plate      

-       Tabung durham                     - Tabung reaksi tutup ulir

-       Kapas                                   - petridis                       

 

                          ¤  BAHAN Media

                                       1) Media GULA – GULA         

-       Bacto pepton                            2.5 gr

-       Nacl                                          1.25 gr

-       Glukosa                                    0.5 gr

-       Laktosa                                     0.5 gr

-       Manitol                                      0.5 gr

-       Maltose                                     0.5 gr

-       Sukrosa                                    0.5 gr

-       phenol  red                

2) Media MRVP ( Methyil Red Voges Proskauer )

   Pada ph 6.9 ± 0.2, suhu 25⁰c dengan komposisi

-    Peptone                                         7.0 g            

-    Glucose                                         5.0 g  

-     Phosphate buffer                         5.0 gr           

3) Media SIM ( Sulfit Indol Motility )

Pada ph 7.3 ± 0.2, suhu 25⁰c dengan komposisi

-       Tryptone                                      20 gr

-       Pepton                                         6.1 gr

-       Ferrous ammonium sulphate        0.2 gr

-       Sodium thiosulphate                     0.2 gr

-       Agar                                            3.5 gr

       4) Media TSIA ( Triple Sugar Iron Agar )

Pada ph 7.4 ± 0.2, suhu 25⁰c dengan komposisi

-       ‘lab-lemco’powder                        3.0 g

-       Yeast Extract                                3.0 g

-       Proteose Peptone No. 3                2.0 g

-       Dextrose                                       1.0 g

-       Lactose                                       10.0 g

-       Sucrose                                       10.0 g

-       Ferric citrate .                              0.3 g

-       Sodium Chloride                           5.0 g

-       Sodium Thiosulfate                       0.3 g

-       Agar                                             12.0 g

-       Phenol Red                                  24.0 mg

                                       5) Media SCA ( Simons Citrat Agar )

Pada ph 7.0 ± 0.2, suhu 25⁰c dengan komposisi

-       Magnesium sulphate                    0.20 gr

-       Mono ammonium phosphate        1.0 gr

-       Dipotassium phosphate                1.0 gr

-       Sodium citrate                             2.0 gr

-       Agar                                            15 gr

-       Bromthymol blue                          0.08 gr

6)    Media DN ase

Pada ph 7.3 ± 0.2, suhu 25⁰c dengan komposisi

-       Tryptose                                      20 gr

-       Deoxyribonucleic acid                  2.0 gr

-       Sodium chloride                           5.0 gr

-       Agar                                            12 gr

 

 

CARA KERJA         :     Disiapkan semua peralatan dan bahan yang akan dipergunakan 

1)    Pembuatan media Gula – gula

Ø  Ditimbang 1.25 gr Nacl, 2.5 gr Pepton, dan Gula-gula  masing-masing 0.5 gr

Ø  Dimasukkan Nacl dan pepton ke dalam Erlenmeyer, dilarutkan dengan 250 ml aquades

Ø  Dipanaskan di hot plate dan ditambahkan ± 8 tetes phenol red sampai homogen.

Ø  Dibagikan ke dalam Erlenmeyer masing – masing ± 50 ml

Ø  Di tambahkan media gula – gula pada masing-masing Erlenmeyer, yaitu ; glukosa,laktosa manitol,maltose dan sukrosa

Ø  Dibagikan masing-masing media gula-gula tersebut ke dalam tabung reaksi kecil yang sudah terdapat tabung durham di dalamnya sebanyak ± 2.5 ml dan ditutup kapas warni sesuai media gula –gula tersebut

·       Glukosa                        ;     kuning

·       Laktosa                        :     ungu

·       Manitol                         :     hijau

·       Maltose                        :     merah

·       Sukrosa                        :     biru

Ø Disterilkan dengan autoklaft dengan suhu 121⁰C selama 15 menit

Ø Dibiarkan dingin

2)    Pembuatan media MRVP

Ø  Ditimbang 1.7 gr MRVP ,dilarutkan dalam 200 ml aquades

Ø  Dipanaskan diatas hot plate,diaduk sampai homogen

Ø  Dimasukkan ke tabung reaksi kecil ± 2 ml,lalu ditutup dengan kapas

Ø  Disterilkan dengan autoklaft dengan suhu 121⁰C selama 15 menit

Ø  Dibiarkan dingin

3)    Pembuatan media SIM

Ø  Ditimbang 1.8 gr SIM,dilarutkan dalam 50 ml aquades

Ø  Dipanaskan diatas hot plate,diaduk sampai homogen

Ø  Dimasukkan ke tabung reaksi kecil ± 2 ml,lalu ditutup dengan kapas

Ø  Disterilkan dengan autoklaft dengan suhu 121⁰C selama 15 menit

Ø  Dibiarkan dingin dan semi solid

4)    Pembuatan media TSIA

Ø  Ditimbang 4.5 gr TSIA,dimasukkan ke dalam beaker glass yang berisi 60 ml aquades

Ø  Dipanaskan diatas hot plate,diaduk sampai homogen

Ø  Dimasukkan ke tabung reaksi kecil ± 3 ml,lalu ditutup dengan kapas

Ø  Disterilkan dengan autoklaft dengan suhu 121⁰C selama 15 menit

Ø  Dimiringkan tabung  45⁰ setelah disterilkan

Ø  Dibiarkan dingin dan padat

5)    Pembuatan media SCA

Ø  Ditimbang 1.25 gr SCA, dilarutkan dalam 50 ml aquades

Ø  Dipanaskan di hot plate sampai homogen

Ø  Dimasukkan ke tabung reaksi kecil ± 3 ml,lalu ditutup dengan kapas

Ø  Disterilkan dengan autoklaft dengan suhu 121⁰C selama 15 menit

Ø  Dimiringkan tabung  45⁰ setelah disterilkan

Ø  Dibiarkan dingin dan padat

6)    Pembuatan media DN ase

Ø  Ditimbang 1.95 gr media DN ase, dimasukkan ke dalam Erlenmeyer, dilarutkan dalam 50 ml aquadest

Ø  Dipanaskan diatas hot plate diaduk sampai homogen.

Ø  Ditutup bagian mulut Erlenmeyer dengan kapas dan dibungkus kertas

Ø  Disterilkan dalam autoclave selama 15 menit suhu 121^oC

Ø  Dituang ke petridist ± 15 ml secara aseptis.

Ø  Dibiarkan dingin dan padat

 

 

HASIL                               :         Dihasilkan media dalam tabung – tabung atau plate

1.    Media Gula - gula                        

2. Media MRVP

3. Media SIM                                

4. Media TSIA                                                   

5.Media SCA   

6. Media DN ase

                                                    

                       

                                     

PEMBAHASAN CATATAN          ;

 Untuk teknik pembuatan media dengan mempergunakan glukosa, laktosa, mannosa, maltosa, sakarosa, dan laktosa broth disebut juga dengan media gula-gula. Media gula-gula adalah air pepton yang ditambah gula tertentu. Tujuannya adalah untuk mengetahui apakah mikroba yang dihadapi dapat atau tidak menguraikan jenis gula yang diberikan. Bila dapat, apakah dapat membentuk gas atau tidak. Untuk medium ini dipakai air pepton, jenis gula tertentu 1%, dan indikator (fenol red) yang berguna untuk melihat ada atau tidaknya pembentukan asam. Selain itu juga, dipergunakan tabung Durham untuk mengetahui ada tidaknya pembentukan gas sebagai hasil penguraian gula dalam medium. Tabung Durham diletakan terbalik di dalam tabung gula sehingga gas yang terbentuk akan tertampung di dalam tabung tersebut. Sebelum dipakai, media gula-gula ini harus selalu diperiksa apakah masih steril atau tidak. Bila telah keruh atau kuning berarti media tidak dapat dipergunakan lagi. Sifat penguraian terhadap gula dari setiap mikroba adalah berlainan, dengan demikian hasil penguraian (reaksi) ini dapat dipakai untuk determinasi suatu jenis bakteri sehingga dapat ditentukan spesiesnya.

Media Methyl Red berguna untuk mengetahui adanya pembentukan asam dengan pH dibawah 4. Methyl Red adalah suatu indikator yang akan menunjukan warna merah bila pH dibawah 4.

Pada media Voges Proskaur akan diselidiki apakah  bakteri yang akan ditanami nanti dapat membentuk Acethyl methyl carbinol atau tidak. Media VP ini juga memiliki fungsi yang sama dengan media MR..

Hasil yang praktikan peroleh dari pembuatan media Simon Citrat (SC) adalah media tersebut berwarna hijau. Medium ini juga digunakan untuk Differential Diagnose (DD), antara bakteri Coli dan Aerobacter aerogenes. Aerobacter aerogenes dapat hidup dengan citrat sebagai sumber C. Maka mono amonium fosfat akan digunakan sampai terurai, dari penguraian ini diantaranya adalah dihasilkan NH₃.

           Media TSIA,menguji kemampuan golongan enterobacteriaceae dalam memfermentasi lactose,sukrosa, dan glukosa,juga untuk memproduksi hydrogen sulfide.

          Pada Media SIM,motyliti dan indol sangat membantu untuk identifikasi golongan enterobacteriaceae,kedua tes yang penting ini dikombinasikan dengan produksi sulphide dalam satu tabung

             Pada media  DN ase Koloni memproduksi Hidrolisa Dnase asam deoksiribonukleat isi dari media ini berada di sekitar mereka

 

KESIMPULAN                   :         Media-media di atas digunakan untuk menunjang uji biokimia yaitu  identifikasi kuman Enterobacteriaceae yang merupakan kelompok besar spesies bakteri penghuni usus besar manusia dan hewan,umumnya meragi laktosa.  Tes ini  biasa disebut juga tes IMVIC . adalah uji IMViC, yang merupakan singkatan dari uji Indol, Methyl Red, Voges-Proskaeur, dan citrate.

 

1. Triple Sugar Iron Agar (TSIA)

Merupakan media padat untuk membedakan sifat-sifat kuman secara

biokimia.

2. Sulfide Indol Motility (SIM Medium)

Merupakan media yang berfungsi untuk mengetahui terbentuknya sulfide,

indol dan mengetahui pergerakan kuman.

3. Metil Red and Voges Proskauer (MR-VP Medium)

Merupakan media yang digunakan untuk mengetahui terbentuknya asam setelah ditetesi dengan reagen MR, sedangkan test VP digunakan untuk mengetahui terbentuknya asetil metil karbonil.

4. Simmon’s Citrat Agar(SCA)

Merupakan media yang berfungsi untuk mengetahui kemampuan kuman dalam memanfaatkan natrium citrat sebagai sumber carbon untuk keperluan hidupnya

5. Gula-gula

Kemampuan organisme untuk melakukan fermentasi karbohidrat tertentu yang tergabung dalam medium dasar dan membentuk asam atau asam dengan gas yang dapat dilihat pada media gula-gula

6. DN ase

Untuk identifikasi mikroorganisme, khususnya Staphylococcus yang Dnase +

 

 

Daftar pustaka                   ;

-       Waluyo, L. 2005. Mikrobiologi Umum. UMM Press: Malang

-       Jewetz, 2007, Mikrobiologi Kedokteran, Cetakan I Edisi 23, Jakarta : Buku Kedokteran EGC

-       Volk & Wheeler. 1993. Mikrobiologi Dasar Jilid 1 Edisi kelima. Erlangga:  Jakarta.

-       -E.Y.Bridson,1998. The OXOID MANUAL.Edisi 8, OXOID:England.

-       Fardiaz, Srikandi. 1993. Analisis Mikrobiologi Pangan. Raja Grafindo Persada. Jakarta.

 

Tanda Tangan                             :

 

Dosen pembimbing		Nilai	Mahasiswa
( Bapak Arief )	( Ibu Ira Nuraeni)		(                     )