PRINSIP DAN CARA KERJA PEWARNAAN GRAM PADA PRAKTIKUM BAKTERI

 PEWARNAAN GRAM

PRINSIP :

Bakteri dengan pewarna utama (primary stain) yaitu dengan kristal violet atau gentilen violet akan memberikan warna ungu pada bakteri, selanjutnya melalui fiksasi dengan lugol (mordant) akan menguatkan dan melekatkan zat warna utama, selanjutnya dengan penambahan alkohol akan melunturkan dan memucatkan zat warna utama sehingga pada sel bakteri gram negatif sel menjadi tidak berwarna, akan tetapi pada sel bakteri gram positif tidak mengalami pelunturan sehingga tetap berwarna ungu. Pada pemberian warna tandingan (Counter stain) yang berbeda dengan zat warna utama yaitu Safranin yang akan menyebabkan sel bakteri gram negatif akan menyerap warna tersebut menjadi merah.

CARA KERJA :

1. Gunakan teknik aseptik dalam pembuatan olesan / sediaan bakteri pada objek glass
2. Olesan biarkan mengering di udara dan lakukan pemanasan fiksasi
3. Teteskan kristal violet pada olesan dan biarkan selama 1 menit
4. Bilas dengan air menggunakan pipet tetes 
5. Genangi dengan Grams iodine (lugol) selama 1 menit 
6. Bilas dengan air menggunakan pipet tetes
7. Cuci olesan dengan alkohol 95% dengan cara tetes demi tetes sampai kristal violet terlihat luntur dari olesan (-+ 2 detik) 
8. Bilas dengan air menggunakan pipet tetes
9. Genangi dengan pewarna tandingan yaitu safranin selama 30-45 detik
10. Bilas dengan air menggunakan pipet tetes 
11. Tiriskan kaca objek yang terdapat olesan atau sediaan bakteri dan seraplah kelebihan air pada olesan dengan menekankan kertas serap secara hati-hati